Analyse d'ADN à 260 nm
La longueur d'onde d'absorption maximale de l'ADN est de 260 nm. Lors d'une mesure dans une cellule de 10 mm, la concentration d'ADN à double brin est d'environ 50 µg/mL pour 1 unité d'absorbance, avec un coefficient d'extinction moyen de 0,020 (µg/mL)-1 cm-1.
Le ratio 260/280 permet de détecter une contamination des acides nucléiques par des protéines. Sa valeur varie entre 1,8 et 2,0 pour de l'ADN et entre 2,0 et 2,2 pour de l'ARN.
Un ADN pur doit avoir un rapport DO 260 / DO 280 compris entre 1,8 et 2. Une éventuelle contamination par du phénol peut être recherchée en mesurant l'absorption à 270 nm. Remarque : l'ADN peut aussi être dosé avec plus de sensibilité et de spécificité par fluorimétrie après coloration par un produit spécifique.
L'hyperchromicité ou effet hyperchrome est la propriété des polymères biologiques, et en particulier l'ADN et l'ARN, de voir leur absorption dans l'UV augmenter lorsqu'ils subissent une dénaturation, c'est-à-dire une perte de leur structure secondaire.
Le maximum du spectre d'absorption de l'ADN se situant autour de 260 nm, les lampes UVC « 254 nm » ont été largement employées pour étudier les effets intra‐cellulaires des UV.
Il n'existe pas d'anémie hyperchrome : si un globule rouge macrocytaire (de grande taille) contient plus d'hémoglobine qu'un globule rouge normocytaire (de taille normale), cela est dû uniquement à l'augmentation de volume et non de concentration.
Ainsi, l'ajout d'éthanol ou d'alcool isopropylique (alcool à friction) fera se regrouper l'ADN qui formera un précipité blanc visible. Il est important d'utiliser de l'alcool froid, car il permet d'extraire une plus grande quantité d'ADN. Si l'alcool est trop chaud, l'ADN peut se dénaturer, ou se désintégrer.
Le corps humain est constitué de milliards de ”cellules” comportant chacune un noyau. Ce noyau renferme toute notre information génétique. Celle-ci est contenue dans nos chromosomes qui contiennent eux-mêmes notre ADN.
L'ADN est insoluble dans l'alcool.
La mesure de l'absorbance dans l'UV pour déterminer la concentration en protéines est une méthode de quantification relativement simple. Les acides aminés présentant des chaînes latérales aromatiques (tryptophane, tyrosine…) sont responsables de l'absorbance caractéristique des protéines à 280 nm.
Dans les conditions de mesure ( pH voisin de 7), c'est surtout la tyrosine qui est responsable de l'absorbance vers 280 nm.
ARN : il est conseillé de conserver les ARN à – 80 °C, év entuellement sous forme précipitée dans l'éthanol, pour une conservation à long terme. Elle passe par la tenue de documents écrits ou numériques archivés : cahiers de laboratoires, modes opératoires, procédures.
Absorption de la lumière
Au-dessus de 260 nm, la plus grande partie de l'absorption ultraviolette des protéines provient de leur teneur en tryptophane et parfois en tyrosine et en phénylalanine. Ces acides aminés ont une telle absorption à cause de leur nature aromatique due à la présence d'un cycle benzénique.
L'absorbance des échantillons d'ADN à 260 nm est actuellement le plus souvent mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre à microvolume, mais il est également possible d'utiliser un spectrophotomètre à cuvette ou un lecteur de microplaques.
La technologie « Sample Intelligence Acclaro™ » de l'appareil NanoDrop™-ONE permet d'identifier les contaminants les plus courants comme les protéines, le phénol ou la guanidine et de corriger les absorbances. Les concentrations des acides nucléiques mesurées par le NanoDrop™-ONE sont alors plus précises et fiables.
Chaque cellule -ou presque- du corps humain possède 23 paires de chromosomes. Il y a donc 46 chromosomes par cellules, c'est-à-dire 46 très longs morceaux de la molécule d'ADN. La raison pour laquelle on a deux chromosomes de chaque sorte est qu'on en obtient un de son père et un de sa mère.
Les ARN messagers (ou ARNm) sont comme ces copies, des molécules chargées de transmettre l'information codée dans notre précieux génome, pour permettre la synthèse des protéines nécessaires au fonctionnement de nos cellules.
Composée d'acides organiques, lesquels entrent dans la composition de l'ADN, l'urine offre de nouvelles possibilités en ce qui a trait au dépistage des maladies héréditaires. C'est pourquoi, en 1972, Bernard Lemieux a lancé le premier programme urinaire pour le dépistage des maladies héréditaires chez les enfants.
La banane est écrasée afin de désagréger les tissus et de fragiliser les parois cellulaires. Puis on y rajoute du sel, ce qui permet d'éliminer les molécules d'eau associées à l'ADN et facilitera son isolation. On ajoute ensuite du liquide vaisselle.
Tous les êtres vivants ont de l'ADN que ce soit une plante, un fruit, ou un animal par exemple. Une molécule d'ADN déroulée mesure environ 2m de long ! Compactée, la molécule d'ADN tient dans le noyau d'une cellule !
Le VGM rend compte de la taille moyenne des globules rouges. Il permet notamment le diagnostic d'une anémie. Le taux normal du VGM est compris entre 80 et 95 fl. Si le taux est trop bas, on parle d'une microcytose.
Les anémies macrocytaires (VGM élevé) sont le plus souvent causées par un déficit en vitamine B12 (malabsorption, malnutrition, anémie pernicieuse) ou l'alcoolisme. D'autres causes incluent un mauvais fonctionnement de la glande thyroïde et certains problèmes de la moelle osseuse.
Pour information, chez l'homme, on estime que le nombre normal d'hématies est compris entre 4 et 5,7 millions par mm3 de sang. Chez la femme, il est plutôt compris entre 3,8 et 5,3 millions par mm3. On parle de polyglobulie lorsque ce nombre est anormalement élevé ; d'anémie lorsqu'il est trop bas.