Les tampons de lyse comprennent des détergents et d'autres réactifs pour obtenir une solubilité efficace des protéines. Cet article présente une sélection de tampons de lyse, de kits et de produits biochimiques associés couramment utilisés.
La méthode de lyse alternative des bactéries consiste à alterner la congélation et le broyage. Dans cette méthode, les cellules sont congelées directement dans de l'azote liquide, et les cellules congelées sont réduites en poudre à l'aide de mortier et de pilon.
Conservation. On veut éviter que la protéine soit dégradée par des protéases c'est pourquoi on travaille souvent à +4°C et avec des inhibiteurs de protéases. A plus long terme on peut procéder à une congélation (de -20°C à -80°C).
La lyse se produit lorsqu'une molécule perce la membrane cellulaire et provoque un apport massif d'eau dans la cellule. La cellule meurt par éclatement à la suite du choc osmotique qui s'ensuit (le milieu extra cellulaire est hypotonique comparativement au milieu intracellulaire).
Préparer tampon Laemli 4X :
- 25 mL Tris/SDS pH 6.8 4X (6.05 g Tris-base, 0.4 g SDS, compléter avec H20 à 100 mL). - 20 mL Glycérol - 4 g SDS - 2 mL Mercaptoéthanol - 1 mg (minimum) Bromophénol bleu - Compléter avec H2O à 50 mL. C pendant 2-3 minutes.
Rôle de Acide éthylènedinitrilo tétra-acétique EDTA
Après la lyse cellulaire, l'EDTA limite la dégradation de l'ADN en liant les ions Mg2+, cofacteurs nécessaires des nucléases bactériennes. De cette manière, il inhibe les nucléases conduisant à la rupture de la paroi cellulaire et de la membrane cellulaire.
Les protéases, présentes dans les sucs digestifs, participent à la digestion des protéines alimentaires ; les principales sont la pepsine, sécrétée par l'estomac, la trypsine et la chymotrypsine, sécrétées par la portion exocrine du pancréas.
Le corps humain est constitué de milliards de ”cellules” comportant chacune un noyau. Ce noyau renferme toute notre information génétique. Celle-ci est contenue dans nos chromosomes qui contiennent eux-mêmes notre ADN.
Ainsi, l'ajout d'éthanol ou d'alcool isopropylique (alcool à friction) fera se regrouper l'ADN qui formera un précipité blanc visible. Il est important d'utiliser de l'alcool froid, car il permet d'extraire une plus grande quantité d'ADN. Si l'alcool est trop chaud, l'ADN peut se dénaturer, ou se désintégrer.
Tout d'abord l'organisme transforme l'éthanol (alcool pur) en aldehyde, une toxine très dangereuse pour l'ADN. Puis il détruit cette toxine grâce à une enzyme spécifique appelée «ALDH2».
Ce tampon sert surtout à rincer les cellules lorsqu'il faut enlever toute trace de milieu avant de les traiter. Il est prévu pour un usage sur les cellules maintenues hors de l'incubateur à CO2 et n'est pas conçu pour des incubations à long terme.
Le PBS (Phosphate Buffer Saline) est une solution tampon couramment utilisée en biologie. Ses propriétés isotoniques et non-toxiques permettent de maintenir les cellules dans un état viable et sain pendant de courtes périodes, en faisant ainsi un réactif de choix pour toutes les études cellulaires.
La concentration de l'ADN
Pour concentrer l'ADN, on ajoute de l'isopropanol ou de l'éthanol dans la solution aqueuse, qui est dissoute dans un tampon. Enfin, pour supprimer les résidus de contaminants et de phénol, on procède à une purification par chromatographie préparative ou par dialyse.
La lyse isthmique correspond à une fracture de fatigue de la jonction entre les articulaires supérieure et inférieure d'une vertèbre lombaire, en générale la 5ème. Son traitement repose sur des médicaments ou sur une intervention chirurgicale, lorsque la lyse isthmique est particulièrement douloureuse.
L'extraction et la purification des acides nucléiques sont essentielles pour un grand nombre d'études en biologie moléculaire. Le rendement et la pureté des acides nucléiques sont deux éléments importants pour assurer l'efficacité et la fiabilité des analyses.
Le sel facilite le broyage et augmente la dissolution de l'ADN. Avec la pipette compte-goutte, ajouter alors quelques gouttes de liquide vaisselle et bien mélanger (toujours avec le pilon). Le liquide vaisselle contient des substances qui détruisent les membranes des structures cellulaires.
Tous les êtres vivants ont de l'ADN que ce soit une plante, un fruit, ou un animal par exemple. Une molécule d'ADN déroulée mesure environ 2m de long ! Compactée, la molécule d'ADN tient dans le noyau d'une cellule !
La banane est écrasée afin de désagréger les tissus et de fragiliser les parois cellulaires. Puis on y rajoute du sel, ce qui permet d'éliminer les molécules d'eau associées à l'ADN et facilitera son isolation. On ajoute ensuite du liquide vaisselle.
L'ADN est dit «bicaténaire» avec 2 brins disposés en double hélice, et l'ARN est dit «monocaténaire» avec une seule hélice.
Les ARN messagers (ou ARNm) sont comme ces copies, des molécules chargées de transmettre l'information codée dans notre précieux génome, pour permettre la synthèse des protéines nécessaires au fonctionnement de nos cellules.
Chaque cellule -ou presque- du corps humain possède 23 paires de chromosomes. Il y a donc 46 chromosomes par cellules, c'est-à-dire 46 très longs morceaux de la molécule d'ADN. La raison pour laquelle on a deux chromosomes de chaque sorte est qu'on en obtient un de son père et un de sa mère.
Les Protéases :
Encore appelées enzymes protéolytiques, ce sont les enzymes qui ont pour mission de digérer les protéines pour les transformer en acides aminés.
Le protéasome, une machinerie cellulaire qui dégrade les protéines.
La pepsine est une enzyme digestive qui est libérée dans l'estomac lors de l'ingestion d'aliments. Elle sert à décomposer les protéines contenues dans les aliments consommés.