Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Cette technique permet la séparation et l'identification d'une protéine d'intérêt spécifique dans un mélange complexe de protéines, par exemple, un lysat cellulaire.
La méthode d'élimination décrite permet de détecter plusieurs cibles, contrairement au test ELISA qui permet de ne détecter qu'une seule protéine. Étant donné que l'électrophorèse de protéines sur gel sépare les protéines en bandes, il est possible de déterminer la taille de la protéine/du polypeptide cible.
Le Western-Blot
Or la confirmation par WB n'est demandée qu'en cas d'ELISA positif ou équivoque, ce qui pourrait priver un grand nombre de patients d'un diagnostic sérologique et les laisser seuls avec leurs symptômes. Le WB indique quels sont les anticorps sanguins contre des protéines d'un certain poids moléculaire.
Transfert de protéines sur membrane
Les deux méthodes les plus communément utilisées pour le transfert des protéines sont le transfert électrophorétique pour les protéines déjà séparées en gel et la microfiltration (dot-blotting).
Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Cette technique permet la séparation et l'identification d'une protéine d'intérêt spécifique dans un mélange complexe de protéines, par exemple, un lysat cellulaire.
Le nom du western blot, donné à la technique par W. Neal Burnette, est un jeu de mot à partir de la technique du Southern blot ou transfert de Southern, technique de détection d'ADN nommée d'après son inventeur, Edwin Southern et non d'après le point cardinal.
En France, à Paris et en province, le laboratoire Barla http://labo-barla.eu/ réalise les tests sérologies (Elisa et Western Blot), les PCR, Elispot et les analyses d'exploration du système immunitaire : – PCR pour Borrelia, Bartonella, Rickettsies, Anaplasma, Ehrlichia, Coxiella, Francisella, Néoehrlichia mikurensis.
Le test « Elisa » est systématiquement utilisé depuis 2006 pour dépister la maladie, en vertu d'un protocole établi par les autorités sanitaires. S'il est négatif, le dépistage sérologique s'arrête là.
L'interprétation repose sur la distinction de l'isotype : la présence d'IgM évoque une infection à un stade précoce ; les IgM sont encore présentes en début de phase secondaire mais absentes en phase tertiaire ; les IgG apparaissent en fin de phase primaire et sont présentes à titre élevé en phase tertiaire.
Cette technique permet de détecter plusieurs anticorps lors d'une seule et même réaction.
Les contrôles de dépôt sur gel sont utilisés pour confirmer que la quantité de protéines déposée est identique sur l'ensemble des pistes du gel, permettant de normaliser le niveau de protéines détectées.
Le blocage est nécessaire pour saturer les capacités de liaison libres des surfaces.
On distingue plusieurs types d'anticorps : les IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE. Ce sont les isotypes. "La diversité des anticorps se développe au fil des années en fonction des contacts de chacun avec les antigènes, des protéines étrangères dans l'organisme que reconnaissent les anticorps", poursuit notre expert.
L'analyse des protéines
« L'électrophorèse permet de diagnostiquer certaines pathologies liées à un mauvais fonctionnement du foie ou des reins, à une altération des défenses immunitaires, à des symptômes inflammatoires ou à certains cancers ».
Les techniques de Southern blot et de northern blot sont des techniques d'hybridation des acides nucléiques. Elles sont réalisées après séparation des acides nucléiques par électrophorèse et transfert sur membrane de nitrocellulose ou de nylon.
Si elle est dépistée à temps, sachez que le taux de guérison de la maladie de Lyme est élevé. Les antibiotiques sont efficaces dans l'éradication de la bactérie. Toutefois, de nombreux témoignages de personnes atteintes font état de possibles rechutes et d'une errance médicale souvent longue et difficile.
Par la sérologie de Lyme. Il s'agit d'une simple prise de sang qui permet de détecter les anticorps produits par l'organisme en cas d'infection. Les IgM apparaissent 4 à 6 semaines après morsure par une tique infestée par Borrelia, les Ig G apparaissant en 6 à 8 semaines.
A l'inverse, les tests seront le plus souvent positifs chez les patients avec des formes disséminées de la borréliose de lyme (arthrite, manifestations neurologiques, etc.) survenant plus de 4 à 6 semaines après la piqure.
DEDIMED EUROPARC est un laboratoire allemand originaire de Berlin, spécialisé dans les maladies chroniques infectieuses, notamment la Maladie de Lyme. Notre métier consiste à proposer des tests de diagnostic pertinents et fiables, mais aussi d'établir des protocoles de traitement des infections détectées.
Bleu De Coomassie Brillant G-250, MP Biomedicals™
Il s'agit d'une coloration protéique utilisé en électrophorèse. Il a été utilisé dans le dosage des protéines liant le colorant Bradford.
Coloration au rouge Ponceau des protéines totales extraites d'un plant de tabac. Cette manipulation a lieu après le transfert des protéines d'un gel d'acrylamide vers une membrane de nitrocellulose. Elle permet de contrôler la quantité de protéines déposées sur le gel et présentes sur la membrane.
Préparation des échantillons :
Chauffer le tube à l'aide d'un bloc chauffant pendant 10 min à 95°C afin d'accélérer la dénaturation des protéines. Laisser le tube 5 min à température ambiante.
Pour vérifier la présence de protéines on utilise le réactif du Biuret. Le réactif du Biuret est bleu clair. Il devient violet lorsqu'il y a des protéines. Le réactif du Biuret est un liquide permettant de montrer la présence de protéines.