Avec des applications dans les domaines du diagnostic, de la biotechnologie, de la biologie moléculaire, de la protéomique, et bien plus encore, la technique Western Blot est largement utilisée pour évaluer le niveau d'expression des protéines dans les cellules, ainsi que les variations de taille et d'autres propriétés ...
Le Western Blot (aussi appelé immunotransfert) est une technique employée pour analyser des protéines individuelles dans un mélange protéique (par ex., un lysat de cellules).
Le test « Elisa » est systématiquement utilisé depuis 2006 pour dépister la maladie, en vertu d'un protocole établi par les autorités sanitaires. S'il est négatif, le dépistage sérologique s'arrête là.
En France, à Paris et en province, le laboratoire Barla http://labo-barla.eu/ réalise les tests sérologies (Elisa et Western Blot), les PCR, Elispot et les analyses d'exploration du système immunitaire : – PCR pour Borrelia, Bartonella, Rickettsies, Anaplasma, Ehrlichia, Coxiella, Francisella, Néoehrlichia mikurensis.
Les contrôles de dépôt sur gel sont utilisés pour confirmer que la quantité de protéines déposée est identique sur l'ensemble des pistes du gel, permettant de normaliser le niveau de protéines détectées.
Si elle est dépistée à temps, sachez que le taux de guérison de la maladie de Lyme est élevé. Les antibiotiques sont efficaces dans l'éradication de la bactérie. Toutefois, de nombreux témoignages de personnes atteintes font état de possibles rechutes et d'une errance médicale souvent longue et difficile.
A l'inverse, les tests seront le plus souvent positifs chez les patients avec des formes disséminées de la borréliose de lyme (arthrite, manifestations neurologiques, etc.) survenant plus de 4 à 6 semaines après la piqure.
Le test ELISA (acronyme de Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est destiné à détecter et/ou doser une protéine dans le sang. Cette protéine appelée "enzyme", va se fixer à certains constituants spécifiques de la maladie dans le sang, et par repérage et quantification de cette enzyme, la maladie pourra être affirmée.
La technique de dépistage consiste en un test IFi (immuno-fluorescence indirecte) ou ELISA réalisé sur un échantillon sanguin (prise de sang). Lorsque le résultat est négatif, la sérologie est à nouveau effectuée 15 jours plus tard.
L'analyse des protéines
« L'électrophorèse permet de diagnostiquer certaines pathologies liées à un mauvais fonctionnement du foie ou des reins, à une altération des défenses immunitaires, à des symptômes inflammatoires ou à certains cancers ».
Comment faire ? Dans la méthode directe, l'antigène est reconnu directement par un anticorps primaire marqué. Dans la méthode indirecte, l'antigène est d'abord reconnu par un anticorps primaire non-marqué, puis ce dernier est à son tour reconnu par un anticorps secondaire marqué issu d'une autre espèce.
L'interprétation repose sur la distinction de l'isotype : la présence d'IgM évoque une infection à un stade précoce ; les IgM sont encore présentes en début de phase secondaire mais absentes en phase tertiaire ; les IgG apparaissent en fin de phase primaire et sont présentes à titre élevé en phase tertiaire.
Par la sérologie de Lyme. Il s'agit d'une simple prise de sang qui permet de détecter les anticorps produits par l'organisme en cas d'infection. Les IgM apparaissent 4 à 6 semaines après morsure par une tique infestée par Borrelia, les Ig G apparaissant en 6 à 8 semaines.
Le traitement recommandé est : doxycycline1 ou amoxicilline pendant 14 jours en première intention ; • azithromycine pendant 7 jours si la première ligne impossible. Avant et après traitement, il est recommandé de demander au patient de prendre en photo l'érythème migrant aux diffé- rentes phases d'évolution.
IgM positive, IgG positive
Ce résultat suggère une infection dans la phase intermédiaire de la maladie. Il est probable que la possibilité d´infecter à d´autres personne soit basse.
L'anaplasmose peut également s'accompagner de formes de conjonctivite, de pharyngites ou de toux et d'une baisse des globules blanc. Elle est à suspecter chez toute personne à risque présentant un syndrome grippal entre le printemps et l'automne et son diagnostic repose sur la PCR.
Si elle n'est pas traitée, la maladie de Lyme peut passer au stade avancé de la maladie de Lyme disséminée. Selon l'ASPC, on compte parmi les symptômes l'arthrite chronique (douleurs musculaires et articulaires), les troubles neurologiques et du système nerveux.
Il faudra réduire les aliments riches en sucres et à indice glycémique élevé, éviter de trop consommer des graisses animales et saturées, mais aussi des céréales contenant du gluten et des produits laitiers. Il faudra aussi éviter les fritures, les aliments fortement chauffés ou encore les préparations industrielles.
Le nom du western blot, donné à la technique par W. Neal Burnette, est un jeu de mot à partir de la technique du Southern blot ou transfert de Southern, technique de détection d'ADN nommée d'après son inventeur, Edwin Southern et non d'après le point cardinal.
Préparation des échantillons :
Chauffer le tube à l'aide d'un bloc chauffant pendant 10 min à 95°C afin d'accélérer la dénaturation des protéines. Laisser le tube 5 min à température ambiante.
La concentration d'une protéine peut être mesurée directement, par absorbance à 280 nm dans un spectrophotomètre UV-visible, ou indirectement, en utilisant des méthodes colorimétriques telles que les tests BCA ou Bradford. Les protéines peuvent même être quantifiées au moyen de méthodes fluorimétriques.