La chromatographie sur couche mince (CCM, en anglais TLC pour Thin layer chromatography) est une technique de chromatographie planaire dont la phase mobile est liquide. Elle est couramment utilisée pour séparer des composants dans un but d'analyse (CCM analytique) ou de purification (CCM préparative).
Principe. ❯ Une CCM, c'est quoi ? Il s'agit d'une technique d'analyse qui s'appuie sur les différences d'affinités de substances chimiques entre une phase fixe, la plaque, et une phase mobile, l'éluant. Cette différence va permettre la séparation de ces différentes substances sur la plaque.
La chromatographie sur couche mince est la plus simple des méthodes chromatographiques. Elle consiste à placer sur une feuille (papier, silice ou autre, voir plus loin) une tache et de la laisser éluer en la trempant dans un solvant ou un mélange de solvant (appelé éluant), l'éluant diffuse le long du support.
La chromatographie sur couche mince est une technique de séparation et d'analyse des mélanges homogènes. Elle utilise le principe de la migration par capillarité (comme sur un papier buvard) d'une espèce sur un support grâce à sa solubilité dans le solvant choisi.
l'éluant : un solvant pur ou un mélange : il migre lentement le long de la plaque en entraînant les composants de l'échantillon.
On peut alors sécher la plaque pour éviter tout étalement des taches. 5) Révélation : le plus souvent, les produits que l'on a séparés sont incolores, on ne voit alors aucune tache sur la plaque : il faut la révéler.
Le principe de la chromatographie sur papier est simple: la substance qu'on veut analyser est déposée sur la ligne de départ tracée sur un papier buvard. Celui-ci est tenu verticalement. L'eau monte par capillarité le long du papier et entraîne avec elle les substances.
Pour l'éluant, tester avec un mélange d'éther de pétrole (apolaire) et d'acétate d'éthyle (polaire) dans des proportions variées comme 100-0, 75-25, 50-50, 25-75, etc. Affiner ensuite avec un solvant plus polaire si nécessaire (acide acétique).
La plaque est alors retirée de la cuve, la limite supérieure atteinte par le l'éluant constitue le “front de l'éluant et ce dernier est marqué au crayon à papier avant l'éluant qu'il ne sèche.
La chromatographie peut être analytique (visant à l'identification des substances présentes) ou préparative (visant à la séparation des constituants d'un mélange).
Le but est toutefois différent: La chromatographie sur colonne sert à séparer des produits, soit à purifier un produit de réaction. C'est la méthode standard de purification dans un laboratoire de chimie organique.
Des chromatographies d'échanges d'ions classiques peuvent être la purification d'anticorps monoclonaux dans le domaine de la pharmacie, extraction de protéines/vitamines (pharma ou agroalimentaire), procédés à retard d'acides (purification de bain d'acide, métaux)...
Pour reconnaître un complément circonstanciel, on pose les questions « quand ? », « pendant combien de temps ? », « où ? », « comment ? », « dans quel but ? », « pour quelle raison ? », etc.
Les compléments circonstanciels de lieu répondent aux questions : où ?, vers où ?, d'où ?, par où ? Ils peuvent donc préciser : la localisation, le lieu où l'on est : Mon frère réside en Espagne.
Le complément circonstanciel de temps (C.C.T.) répond aux questions « quand ?», « pendant combien de temps ? » posées après le verbe.
L'ordre d'élution est a priori celui des pHi décroissants sur échangeur de cations et des pHi croissants sur échangeur d'anions. Cette ordre n'est que "a priori" puisqu'il peut exister des répartitions de charge hétérogènes et des effets stériques qui perturbent...
Mise en place du matériel. On place environ 10 mL d'éluant dans la cuve à chromatographie, afin d'avoir un demi centimètre d'éluant au fond de celle-ci. On y place le papier absorbant et on referme la cuve afin de laisser le temps à l'équilibre liquide/vapeur d'être atteint.
Le facteur de rétention (Rf) est défini comme le rapport de la distance parcourue par l'analyte (da) sur la distance parcourue par l'éluant (ds). à 2<= k <= 10 en chomatographie sur colonne.
On détermine le ratio frontal Rf = L1/L2 étant le rapport entre la distance parcourue par le soluté divisé par la distance parcourue par le front du solvant. Le principe de séparation des composés par CCM est proche de celle en HPLC.
Le détecteur est relié par un câble à la station de données informatiques, le module du système HPLC qui enregistre le signal électrique nécessaire pour générer le chromatogramme sur son écran et pour identifier et quantifier la concentration des constituants de l'échantillon (voir figure F).
En chromatographie sur colonne, la phase mobile est tout solvant approprié. On l'appelle aussi l'éluant. Tu dissous ton mélange d'échantillons dans le solvant et le verses dans la colonne pour qu'il traverse la phase stationnaire.
Il faut laisser saturer l'atmosphère de la cuve en vapeur de phase mobile ce qui implique une fermeture étanche et du temps... Sinon les migrations seront perturbées par les courants latéraux d'évaporation de la phase mobile.
On utilise ici de l'éthanol. En effet, la tartrazine a peu d'affinité pour la silice par rapport à l'éluant, qu'on utilise l'eau salée ou l'éthanol.
La chromatographie sur colonne est fondée sur le même principe que la chromatographie sur couche mince, sauf que la silice ne se trouve pas sur une plaque mais dans une colonne. Cette technique est très utilisée dans la purification en chimie organique.