L'électrophorèse SDS-PAGE (électrophorèse en gel de polyacrylamide contenant du dodécysulfate de sodium) est une technique consistant à faire migrer des protéines dans un gel, sous l'influence d'un champ électrique, permettant ainsi leur séparation.
Comme chaque protéine est plus ou moins soluble en solution selon sa composition, on peut en séparer plusieurs en fonction de leur tendance à précipiter plus ou moins vite quand on change la force ionique de la solution qui les contient.
- tampon de résolution : le gel de résolution est imprégné en tampon [Tris-HCl] = 0,375 mol/L pH 8,8 avec- [SDS] = 1 g/L .
Ces gels sont utilisés pour évaluer visuellement le poids moléculaire des protéines par rapport à celui de protéines connues.
L'électrophorèse sur gel d'agarose est communément utilisée pour séparer des molécules en fonction de leur charge, leur taille et leur forme. Il s'agit d'un moyen de séparation particulièrement efficace pour des biomolécules chargées telles que l'ADN, l'ARN et les protéines.
Les tampons de chargement d'ADN sont utilisés pour charger des échantillons d'ADN sur des gels d'agarose ou d'ADN SDS pour l'électrophorèse sur gel. Les tampons de chargement d'ADN contiennent un colorant et un agent de densité.
L'EPS est un examen de biologie médicale qui a pour but la séparation et l'analyse des protéines sériques. Une EPS peut conduire à détecter une immunoglobuline monoclonale, une hypergammaglobulinémie et plus rarement une hypogammaglobulinémie.
Principe et mise en oeuvre de la SDS-PAGE
L'électrophorèse SDS-PAGE (électrophorèse en gel de polyacrylamide contenant du dodécysulfate de sodium) est une technique consistant à faire migrer des protéines dans un gel, sous l'influence d'un champ électrique, permettant ainsi leur séparation.
L'électrophorèse est une technique d'analyse qui permet de séparer et quantifier les protéines présentes dans le sang (albumine, globuline). Cet examen appelé parfois "EPP" peut déceler des maladies immunitaires, inflammatoires, cirrhotiques, néphrotiques, mais aussi des cancers.
En fonction de l'analyse du tracé électrophorétique, on peut savoir si la personne est drépanocytaire, hétérozygote ou homozygote. Si elle est hétérozygote, cela signifie qu'elle a 50% de version saine et 50% de version non saine. Si elle est homozygote, l'atteinte peut être plus grave.
-le β mercaptoéthanol : composé qui exerce une action dénaturante sur les protéines oligomériques en rompant les ponts disulfures ce qui désorganise leur structure tridimensionnelle.
Après la migration d'électrophorèse, le gel est éclairé sous ultraviolet afin d'observer les bandes d'ADN fluorescente. Les bandes peuvent être alors découpées et séparées du gel, puis dissoutes afin de récupérer l'ADN purifié.
C'est une étape importante en recherche fondamentale pour la caractérisation de la fonction (études des propriétés), de la structure, sa composition en acide aminé et des interactions d'une protéine d'intérêt, mais aussi en recherche appliquée et industrie pour préparer des matières et réactifs.
Un des critères à respecter pendant une purification est que plus on fait vite, meilleures sont nos chances d'avoir du bon matériel à la fin. Mieux vaut donc autant que possible limiter les étapes en nombre et en durée.
1) Solvants organiques. 2) Types d'extraction (solvant, aqueuse, vapeur etc.). 3) Moyens de purification: filtration, centrifugation, chromatographie, électrophorèse. 4) Techniques de conservation: froid (cryoconservation), évaporation, lyophilisation.
L'évaluation de la pratique d'un professionnel de santé consiste à analyser son activité clinique réalisée par rapport aux recommandations professionnelles disponibles actualisées, afin de mettre en œuvre un plan d'amélioration de son activité professionnelle et de la qualité des soins délivrés aux patients.
Assainissant : l'EPP peut être appliqué sur la peau, localement, en cas d'acné. Il peut être ajouté au shampoing ou au dentifrice pour une meilleure hygiène. Lutte contre les aphtes : les propriétés antivirales de l'EPP sont utiles en gargarisme, ou en application sur l'aphte à l'aide d'un coton tige.
En fonction du pH la protéine sera chargée positivement ou négativement, elle migrera donc vers l'anode (chargée +) ou la cathode (chargée -). Les gels supportés prêts à l'emploi sont constitués d'une mince couche d'agarose coulée sur un support plastique de 100 mm x 75 mm permettant leur manipulation aisée.
Les résultats de l'électrophorèse de l'hémoglobine sont interprétés par un hématologiste et peuvent indiquer qu'une seule des deux copies du gène est anormale (ex. : trait thalassémique) ou les deux. Les résultats sont interprétés en tenant compte du contexte clinique et des résultats de la formule sanguine.
Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Cette technique permet la séparation et l'identification d'une protéine d'intérêt spécifique dans un mélange complexe de protéines, par exemple, un lysat cellulaire.
Le test d'Emmel révèle la présence de l'hémoglobine drépanocytaire S dans les hématies. Ce test a une haute valeur qualitative mais il ne permet pas de différencier les porteurs sains AS des sujets atteints d'un syndrome drépanocytaire majeur (SS, SC, Sβ°thalassémique, Sβ+thalassémique …).
Interprétation quantitative
Taux de protéines normal: % = valeur en g/L Taux de protéines anormal: Étudier les % : déterminer si le taux anormal est du à une variation de l'ensemble (hémodilution ou hémoconcentration) ou à la modification importante de l'une d'entre elles.
Il s'agit de protéines présentes dans le plasma sanguin. Son dosage permet de dépister la présence de pathologies ou d'une carence.