Le test Western Blot est une technique populaire utilisée pour la détection et la quantification des protéines. Cette technique permet la séparation et l'identification d'une protéine d'intérêt spécifique dans un mélange complexe de protéines, par exemple, un lysat cellulaire.
La méthode d'élimination décrite permet de détecter plusieurs cibles, contrairement au test ELISA qui permet de ne détecter qu'une seule protéine. Étant donné que l'électrophorèse de protéines sur gel sépare les protéines en bandes, il est possible de déterminer la taille de la protéine/du polypeptide cible.
Le nom du western blot, donné à la technique par W. Neal Burnette, est un jeu de mot à partir de la technique du Southern blot ou transfert de Southern, technique de détection d'ADN nommée d'après son inventeur, Edwin Southern et non d'après le point cardinal.
Les techniques de Southern blot et de northern blot sont des techniques d'hybridation des acides nucléiques. Elles sont réalisées après séparation des acides nucléiques par électrophorèse et transfert sur membrane de nitrocellulose ou de nylon.
L'analyse des protéines
« L'électrophorèse permet de diagnostiquer certaines pathologies liées à un mauvais fonctionnement du foie ou des reins, à une altération des défenses immunitaires, à des symptômes inflammatoires ou à certains cancers ».
Le Western-Blot
Or la confirmation par WB n'est demandée qu'en cas d'ELISA positif ou équivoque, ce qui pourrait priver un grand nombre de patients d'un diagnostic sérologique et les laisser seuls avec leurs symptômes. Le WB indique quels sont les anticorps sanguins contre des protéines d'un certain poids moléculaire.
En France, à Paris et en province, le laboratoire Barla http://labo-barla.eu/ réalise les tests sérologies (Elisa et Western Blot), les PCR, Elispot et les analyses d'exploration du système immunitaire : – PCR pour Borrelia, Bartonella, Rickettsies, Anaplasma, Ehrlichia, Coxiella, Francisella, Néoehrlichia mikurensis.
On distingue plusieurs types d'anticorps : les IgG, IgM, IgA, IgD ou IgE. Ce sont les isotypes. "La diversité des anticorps se développe au fil des années en fonction des contacts de chacun avec les antigènes, des protéines étrangères dans l'organisme que reconnaissent les anticorps", poursuit notre expert.
Cette technique permet de détecter plusieurs anticorps lors d'une seule et même réaction.
Comment faire ? Dans la méthode directe, l'antigène est reconnu directement par un anticorps primaire marqué. Dans la méthode indirecte, l'antigène est d'abord reconnu par un anticorps primaire non-marqué, puis ce dernier est à son tour reconnu par un anticorps secondaire marqué issu d'une autre espèce.
Le blocage est nécessaire pour saturer les capacités de liaison libres des surfaces.
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Il s'agit d'une coloration protéique utilisé en électrophorèse. Il a été utilisé dans le dosage des protéines liant le colorant Bradford.
L'interprétation repose sur la distinction de l'isotype : la présence d'IgM évoque une infection à un stade précoce ; les IgM sont encore présentes en début de phase secondaire mais absentes en phase tertiaire ; les IgG apparaissent en fin de phase primaire et sont présentes à titre élevé en phase tertiaire.
Les contrôles de dépôt sur gel sont utilisés pour confirmer que la quantité de protéines déposée est identique sur l'ensemble des pistes du gel, permettant de normaliser le niveau de protéines détectées.
Par la sérologie de Lyme. Il s'agit d'une simple prise de sang qui permet de détecter les anticorps produits par l'organisme en cas d'infection. Les IgM apparaissent 4 à 6 semaines après morsure par une tique infestée par Borrelia, les Ig G apparaissant en 6 à 8 semaines.
Le test « Elisa » est systématiquement utilisé depuis 2006 pour dépister la maladie, en vertu d'un protocole établi par les autorités sanitaires. S'il est négatif, le dépistage sérologique s'arrête là.
Le laboratoire SYNLAB effectue un bilan global basé sur : une analyse ELISPOT Borrelia (recherche de la réponse des cellules T Antigène-spécifique), une analyse Immunoblot Borrelia (recherche d'anticorps spécifiques IgG et IgM) une sérologie Babesia (recherche d'anticorps IgG).
Un érythème migrant s'étend à plus de 5 cm de diamètre au site de la morsure de tique. Il est habituellement indolore et non prurigineux. Dans bien des cas, un érythème migrant ne présente pas de forme de cible classique.
La maladie de Lyme se traite avec des antibiotiques. La conduite thérapeutique (choix de l'antibiotique, posologie, durée du traitement) dépend de l'âge et des atteintes présentes, d'où l'importance de procéder à examen physique complet incluant un examen neurologique. L'efficacité du traitement s'évalue cliniquement.
A l'inverse, les tests seront le plus souvent positifs chez les patients avec des formes disséminées de la borréliose de lyme (arthrite, manifestations neurologiques, etc.) survenant plus de 4 à 6 semaines après la piqure.
2 Tubes rouges à 37° C bien remplis. Le prélèvement doit se faire dans des tubes préchauffés à 37° C apportés dans la mallette prévue à cet effet (à chercher au laboratoire au moins 1h avant le prélèvement) Prélèvement à jeun impératif. Prévenir le biologiste (téléphoner au 3577 ou 3088 ou 2451 ou 3511)
Une électrophorèse est un procédé qui vise à séparer différentes particules en fonction de leur charge électrique, de leur taille et de leur forme. Cette séparation se fait grâce à un champ électrique généré par des électrodes, mises au contact de la solution à étudier.
L'électrophorèse de l'hémoglobine sert à détecter les anomalies de forme et de concentration de l'hémoglobine, la protéine des globules rouges qui sert au transport de l'oxygène. Le test fait habituellement suite à des résultats anormaux à la formule sanguine (globules rouges, hémoglobine, VGM, etc.)